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人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)试剂盒

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产品名称: 人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)试剂盒
产品型号: α1-AGP
产品展商: ELISA试剂盒
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简单介绍

人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人α1-AGP抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的人α1-AGP与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人α1-AGP抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人α1-AGP抗体与结合在包被抗体上的人α1-AGP结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)试剂盒浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中人α1-AGP的浓度。


人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)试剂盒  的详细介绍


人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)试剂盒

使用说明书

人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)试剂盒基本原理:

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人α1-AGP抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的人α1-AGP与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人α1-AGP抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人α1-AGP抗体与结合在包被抗体上的人α1-AGP结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,人α1-AGP浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中人α1-AGP的浓度。

人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)试剂盒描述:

英文名称 Human α1-AGP (Alpha-1-Acid Glycoprotein) ELISA Kit
中文名称 人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)酶联免疫吸附测定试剂盒
货号 X-EL-H0001c 种属 Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 双抗体夹心法
检测范围 3.125~200ng/mL 灵敏度 1.875ng/mL

试剂盒组成:

中文名称

英文名称

规格

保存

  ELISA酶标板(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标准品&样品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生物素化抗体

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化抗体稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

酶结合物稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反应终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

产品说明书

Product  Description

  1 

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说明
*: [96T/48T](打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整)
#: 
一周内使用可存于4℃,需长时间存放或多次使用建议存于-20.                                      

人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)试剂盒检测前准备工作:

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。

2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象,可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液(加热温度不要超过50℃,使用时洗涤液应为室温)。当日使用。

3. 标准品10000×g离心1分钟,加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中,旋紧管盖,静置10分钟,上下颠倒数次,待其充分溶解后,用移液器将其轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。然后根据需要进行倍比稀释(注:不要直接在反应孔中进行倍比稀释)。建议配制成以下浓度:按照稀释方法图例 标准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中,混匀即可,其余浓度依此类推。 

4. 生物素化抗体工作液:实验前计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟,以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。

5. 酶结合物工作液:实验前计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟,以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。

当日使用。

人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)试剂盒标准品稀释方法图例:(以500μL/管为例,也可根据实际用量来稀释,如200μL/管)

            

1. 在各孔中加入标准品或样品各100μL 37℃孵育90分钟

2. 加入100μ生物素化抗体工作液,37℃孵育60分钟

3. 洗涤3

4. 加入100μL酶结合物工作液, 37℃孵育30分钟

5. 洗涤5

6. 加入90μL底物溶液, 37℃孵育15分钟左右

7. 加入50μL终止液,立即在450nm波长处测量OD

8. 结果计算

一、操作因素对ELISA结果的影响ELISA操作步骤复杂,操作不当将引起较大的误差。以下叙述各个步骤中的影响因素。

1.加样

2.温育

3.洗涤

4.显色

5.比色

二、灰区的设置通常情况下,ELISA定性实验以“阳性”和“阴性”来报告结果,两者间有一条分界线被称为“阳性判断值”(cut-off valueCO值),这是定性免疫测定结果报告的依据。

三、标本复查ELISA手工检测过程复杂,影响因素较多,即使室内质控在控,也可能因孔间差异而造成结果的差异,因此加大复查力度是保证结果准确性的可靠方法,比如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项目的可疑、弱阳性标本及少见模式的检测结果进行复查。

四、结果判断和报告常用下列几种方法表示结果:

1.定性测定

2.半定量测定 结果一般以滴度表示。

3.定量测定 即用已知量的标准品作一系列稀释后进行ELISA测定,绘制标准曲线,结果以绝对量或单位表示。在ELISA定量检测中每一块反应板都必须绘制相应的标准曲线。

注意事项:

仔细阅读说明书。

检查试剂盒标签上的有效期。如果超过有效期,请勿使用。

按说明书确定所有试剂齐全(数量、体积)。

标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份。短期内无法实验者,注意低温保存。

准备好所有实验额外所需物品,(比如移液器,试管,清洗器,酶标仪)。

按说明书将所用试剂平衡至室温,根据检测标本数量确定所需试剂的量。

检查试剂盒内每种试剂的贮存条件,保证所有试剂均按照试剂盒内说明书推荐的条件存储。

检查不稳定或者变质的试剂溶液(比如沉淀或变色)。有些试剂,比如标准品稀释液或者检测稀释液,可能在设计时就含有沉淀物。所有试剂在滴入酶标板之前,必需充分混匀。而由于沉淀物的特性,在加入酶标板之前,必需不停搅拌。

保证充分的孵育时间和温度。

切勿使用不同生产批号的试剂取代现有试剂或混合现有试剂。

在混合或溶解蛋白溶液时,避免泡沫产生。

在实验开始之前,安排好实验流程。

在实验开始之前,清洁工作台。

若有问题,应与我公司或代理商的技术支持联系

人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)试剂盒结果判断:

1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图,如设置复孔,则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标,标准品的浓度为纵坐标,绘出标准曲线。

2. 推荐使用专业的曲线制作软件,如curve expert 1.31.4,在软件界面既可根据样品OD值,由标准曲线查出相应的浓度,乘以稀释倍数;亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

3. 若样品OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测,计算浓度时应乘以稀释倍数。 

α1酸性糖蛋白(α1-AGP)试剂盒有效期稳定性考察

本试验以α1酸性糖蛋白(α1-AGP)为例

1.        OD值:

正常保存条件下有效期内和超过有效期2个月所测OD值比较

正常有效期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月有效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:分别于定值血清及血浆中加入一定量的α1酸性糖蛋白(α1-AGP)标准品,重复测定并计算其品均值,回收率为测定值与理论值的比率。

        正常保存条件下有效期内和过有效期2个月elisa 试剂盒回收率检测结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       线性:分别于定值血清及血浆中加入一定量的α1酸性糖蛋白(α1-AGP)标准品,并将标本按1:2,1:4,1:8稀释,线性范围即为稀释后样本中α1酸性糖蛋白(α1-AGP)含量的测定值与理论值的比率。

         正常保存条件下有效期内和过有效期2个月elisa 试剂盒回线性检测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精密度:以样品测定值的变异系数CV表示。CV%=SD/meanx100

批内差:取同一批次试剂盒对低值,中值和高值样本进行定量检测,每份样本测定20次,分别计算不同浓度样本的平均值和SD值。

批间差:选取 3 个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本进行定量测定, 每个样本使用同一试剂盒重复测定 8 次,分别计算不同浓度样本的平均值及 SD 值。(批内差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       正常保存条件下有效期内和过有效期2个月elisa 试剂盒回精密度检测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)试剂盒会出现的问题及解决办法:

1. 加入反应终止液后,没有吸光值或吸光值偏低。

a.原因:未加入酶标记物。

解决办法:请按照操作步骤进行。

b.原因:试剂盒内容物未能充分回。

解决办法:确定试剂盒内容物回温后再进行操作。

c.原因:室温太低。

解决办法:若室温太低(<19),请于操作步骤4,适当延长温育时间。

d.原因:未使用试剂盒的清洗液清洗。

解决办法: 请用试剂盒内所提供的清洗液清洗。

e.原因:试剂盒已过有效期限。

解决办法:请更换成仍在有效期限内的试剂盒。

2. 标准曲线线性不佳,或是平行性不好。

a.原因:温育位置避光不好或受到气流干扰。

解决办法: 请确认温育位置既不透光也不透风(如抽屉内)

b.原因:操作时间拖太久。

解决办法:请在方法熟练后再进行操作。

c.原因:微孔间相互污染。

解决办法: 加样品时,请小心勿溅出微孔外,以免造成其它微孔的污染。

d.原因:标准品或酶标记物所加入的量不一致。

解决办法:请使用已校正过的移液枪,并确保其与吸头之间有高度密合性。

e.原因:添加样品或试剂的操作方法不正确。

解决办法:加样品或试剂时,吸头请勿接触微孔。

f.原因:洗板过程发生问题(如管路堵塞、洗完板后未立刻进行下一步骤)

解决办法:请随时监控洗板机洗板过程,洗完后立即进行下一步骤。

3. 吸光值均偏高(或线性不够陡)

a.原因:室温太高(>25)

解决办法: 若无法降低室内温度,请适当缩短步骤4的温育时间。

b.原因:底物溶液受到污染。

解决办法: 若发现底物溶液已呈现淡蓝色,请不要再使用。

c.原因:反应时间超过太久。

解决办法:请控制反应时间。

d.原因:酶标记物污染了盒内其它试剂。

解决办法:使用过的吸头应立即丢弃,可避免试剂间相互污染,凡是试剂(特别是酶标记物与底物溶液)接触过的容器应立即清洗干净。(先以漂白水浸泡,再以清水冲洗干净,可确保无残留)

4. 阴性标准品的吸光值低于阳性标准品的吸光值。

a.原因:微孔中的试剂未能充分混合。

解决办法: 试剂加完后,需轻敲盘四周使其充分混合均匀。

b.原因:洗板过程发生问题(2-f.)

解决办法:请参考2-f.

c.原因:添加样品或酶标记物的量不一致。

解决办法: 请参考2-d.

 

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