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转基因拟南芥重金属含量和种子萌发率的测定

转基因拟南芥重金属含量和种子萌发率的测定

实验试剂

CdSO4,Na3AsO4,HNO: HClO4 (10:1,v/v)混合液,1/2 MS培养基

实验设备

烘箱,研钵,SB-01原子吸收光谱仪(AAS,SOLAAR-M6,Thermo Jarrell Ash Co. (USA)),生长室

实验材料

野生型和转基因拟南芥

实验步骤

1. 转基因拟南芥重金属含量的测定

  1) 用500 uM CdSO4和500 uM Na3AsO4处理盆栽的野生型和转基因拟南芥植株使得土壤中Cd和As的最终浓度分别为30.3 mg Cd/kg soil和22.7 mg As/kg soil。
  2) 处理4 days后,将植株从花盆中小心取出(尽量不伤害根部),用流水冲洗5min,然后再用去离子水洗净后,分成根叶部(根 莲座叶)和茎部。
  3) 于105℃下杀青10 min,60-70℃下烘至恒重。
  4) 至少300 mg干样品粉碎后,用HNO3:HClO4 (10:1,v/v)混合液消解15 min
    5)   然后用SB-01原子吸收光谱仪(AAS,SOLAAR-M6,Thermo Jarrell Ash Co. (USA))测定重金属含量。

2. 转基因拟南芥种子萌发率和根长度测定

  1) 将拟南芥种子如前述方法消毒后,整齐地铺于含不同种类和不同浓度的重金属的1/2 MS培养基上,生长室中培养60 hr时对种子的萌发情况拍照。对于种子萌发率测定实验,将种子铺于用不同种类和不同浓度的重金属溶液湿润的滤纸上,生长室中培养60 hr时计算种子的萌发率。每组实验设三个重复,每个重复至少萌发50粒种子左右。

  2) 根长度的测定:将拟南芥种子消毒后,于1/2 MS培养基上培养3-7 days后,转移到含不同种类和不同浓度的重金属的1/2 MS培养基上,继续培养7-12days后,拍照,测量根长度和根数目。

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